水牛小腔卵泡分离方法的初步研究

李翠玲，李楠，黄章虎，蒋建荣，陆凤花，石德顺

【摘 要】摘要：本研究比较了不同的分离方法和酶作用的不同时间，以及不同的卵巢表面状态等因素对水牛小腔卵泡分离效果的影响，以期建立有效的水牛小腔卵泡分离体系。结果发现，采用机械与酶结合的方法分离水牛小腔卵泡时，平均每个卵巢获得5.64个小腔卵泡，显著高于机械法分离平均每个卵巢获得的3.12个小腔卵泡数（P＜0.05）；当胶原蛋白酶作用12或15min，每个卵巢平均获得的小腔卵泡数均显著高于5和10min处理组（P＜0.05），两组之间没有显著差异（P＞0.05），但当消化时间延长到20min时，卵泡膜被酶消化而破裂，没法分离到小腔卵泡；从表面小于2mm卵泡且无黄体的卵巢分离获得的小腔卵泡平均数显著高于表面无可见卵泡且有黄体的卵巢组的平均数（7.50和2.25，P＜0.05）。以上结果表明，选用表面无小于2mm卵泡且无黄体的卵巢，采用机械与酶结合的方法，酶作用时间为12～15min分离水牛的小腔卵泡，可获得的小腔卵泡数量最多。

【期刊名称】中国畜牧兽医

【年(卷),期】2011(038)011

【总页数】4

【关键词】水牛；小腔卵泡；分离

哺乳动物从出生开始，其原始卵泡的数量就是一定的，随着周期性排卵，原始卵泡不断发育成初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡、成熟卵泡。而沼泽型水牛一般属于单胎动物，在每一个发情周期中，卵巢上最终只有一个卵泡发育成为优势卵泡而排卵，其他卵泡在发育过程中发生闭锁退化，大量的腔前卵泡与小腔卵泡因最终无法成熟而丢失掉。这对于体外核移植技术、体外受精与单精注射等胚胎工程研究将是一个很大的阻碍，如何提高母畜卵巢上卵泡卵母细胞的利用率已成为目前需要解决的问题。为了充分挖掘卵巢上卵泡的利用率，可分离卵巢上的腔前或小腔卵泡并在体外进行培养，以便获得更多的可用卵母细胞。因此，如何分离出数量多且完整的小腔卵泡，对其今后的发育培养研究有着至关重要的作用。早前，腔前卵泡的分离见于多种动物，如猪（Hirao等，1994）、牛（Figueiredo等，1993）、山羊（Susan等，1989）、水牛等；小腔卵泡的分离多见于小鼠、大鼠（Khatir等，2007）等，水牛的小腔卵泡分离研究较少。鉴于此，本试验比较了不同的分离方法和酶作用的不同时间，以及不同的卵巢表面状态对水牛小腔卵泡分离效果的影响，以期建立有效的水牛小腔卵泡分离体系，为进一步水牛小腔卵泡的培养研究提供充足的材料。