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梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
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梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)
(凝集法)
1.目的:规范实验室TPPA检测操作。2.范围:xxx院xxx科3.测定原理:
将梅毒螺旋体(Nichols株)的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集,产生粒子凝集反应(ParticleAgglutinationTest,PA法)由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且用来测定抗体的效价。4.标本:
4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本,血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆,枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
4.2样本中的沉淀物和悬浮物,红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样本未变质方可使用。
4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。
4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。
5.试剂:珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。
5.1试剂盒在2℃—10℃储存,防止冷冻,避免强光照射,有效期12个月。
5.2试剂盒开启使用后,冷冻干燥品配好后,2℃—10℃保存可使用7日,使用前必须做对照试验。5.3试剂组成
5.3.1溶解液(液体):用于调制致敏粒子和未致敏粒子。5.3.2血清稀释液(液体):用于样品的稀释。5.3.3致敏粒子(冷冻干燥):调制浓度为1%的梅毒螺旋体(Nichols株)致敏明胶粒子。5.3.4未致敏粒子(冷冻干燥)经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
5.3.5阳性对照血清(液体)用抗梅毒螺旋体(Nichols株)家兔免疫血清调制成抗体效价为1:320(最终稀释倍数。6.临床标本测定6.1试剂的调制
6.1.1溶解液(液体):按照测定操作规则使用。6.1.2血清稀释液(液体):按照测定操作规则使用。6.1.3致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。6.1.4未致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。6.1.5阳性对照血清(液体):按照操作规则使用。6.2手工操作步骤
6.2.1用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至第4孔各滴入1滴(25ul)。
6.2.2用微量移液管取样品25ul至第1孔中,然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释
的方式从第1孔稀释至第4孔中。
6.2.3用试剂盒中提供的滴管在第3孔中加入1滴(25ul未致敏粒子,在第4孔中加入1滴(25ul)致敏粒子。
6.2.4用平板混匀器以不会导致微量反应板中的检测物溅出的强度混合30秒钟,加盖后于室温(15~30℃)下水平静置。2小时后,在观察镜上记录并观察其反应图像,即使静置至次日也不影响结果的判定。>>>>>
血清稀释液